Teknik Isolasi Senyawa Kimia (Metabolit Sekunder)

Senyawa bahan alam umumnya berasal dari sumber alami dan yang paling melimpah adalah dari tumbuhan-tumbuhan. Senyawa tesebut terbentuk melalui proses pengubahan metabolit primer menjadi metabolit sekunder. Untuk kepentingan perobatan, pestisida atau yang lainnya, maka senyawa tersebut harus diisolasi dan ditentukan strukturnya. Untuk sampai ketahap elusidasi struktur para kimiawan organik bahan alam tidak terlepas dari bagaimana cara ekstraksi dan isolasi. Keberhasilan isolasi suatu senyawa juga tidak dapat terlepas dari perkembangan teknik isolasi. Berbagai cara tentang teknik isolasi saat ini sudah dikembangkan, meliputi:

1.       Kromatografi kolom (KK)

Kromatografi kolom merupakan teknik isolasi konvensional, namun sampai sekarang masih diperlukan. Pemisahan senyawa dengan cara didasarkan pada faktor tingkat kepolaran senyawa dan dihubungkan dengan tingkat kepolaran pelarut (fasa gerak) dan fasa diam. Para kimiawan organik bahan alam biasanya menggunakan fasa diam silika gel (karena relatif murah) untuk memisahkan senyawa yang relatif non polar sampai semi polar. Senywa yang lebih polar biasanya dipisahkan dengan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Beberapa kelebihan menggunakan cara adalah dapat memuat sampel yang berjumlah besar (tergantung besarnya kolom) dan pengerjaannya cepat. Cara ini juga biasanya digunakan untuk sampel yang masih mentah (crude) dan biaya isolasinya juga relatif murah.. Namun demikian, ada beberapa kelemahan dalam isolasi menggunakan cara ini, misalnya Senyawa minor sukar diisolasi dan hasil isolasi relatif tidak murni.

2.      Kromatografi lapis tipis preparatif (KLT prep)

Teknik pemisahan cara ini juga sering digunakan untuk pemurnian senyawa. Suatu lempeng kaca sebagai matrik yang dilapisi dengan fasa diam digunakan

3.      Kromatografi cair kinerja tinggi preparatif

4.      Teknik kromatotron

Masing-masing teknik isolasi ini mempunyai beberapa kelemahan dan kelebihan.